Ub-PA (泛素活性探针)

产品概述

Ub-PA（Ubiquitin Activity-Based Probe，泛素活性探针）是基于泛素骨架设计的化学探针工具。其 C 末端带有亲电反应弹头（Propargylamide, PA），能够特异性地与 DUB 酶活性中心的催化半胱氨酸残基形成不可逆共价键，实现 DUB 酶的"捕获-标记-鉴定"一站式分析。与荧光底物不同，Ub-PA 不是检测酶活性的底物，而是用于共价标记和富集 DUB 酶蛋白本身的探针工具。

作用机制

Ub-PA 模拟了泛素的天然 C 末端结构，被 DUB 酶识别并结合到活性位点。随后，探针末端的亲电弹头（Propargylamide）与 DUB 催化半胱氨酸的硫醇基团发生亲电加成反应，形成稳定的共价硫醚键，实现 DUB 酶活性形式的不可逆标记。标记后的 DUB-探针复合物可通过 SDS-PAGE / Western Blot 检测，或通过生物素/荧光标签进行亲和富集后质谱鉴定。

应用场景

• 细胞内源性 DUB 酶活性谱分析（DUBome profiling）
• 特定 DUB 家族成员的活性状态鉴定
• DUB 抑制剂在细胞水平上的靶点占位验证（Target Engagement）
• 疾病组织中 DUB 活性异常筛查
• 结合点击化学（Click Chemistry）进行功能化标记

产品优势

• 高选择性：仅标记活性状态的 DUB，不与失活酶或其它半胱氨酸蛋白酶反应
• 共价结合：标记不可逆，适合下游变性质谱样品制备
• 兼容性好：PA 弹头体积小，不影响泛素骨架的识别特异性
• 提供炔基手柄，可经 CuAAC 点击化学引入生物素或荧光标签

实验建议

推荐探针终浓度：1–5 μM。标记反应条件：37°C、30–60 min。裂解缓冲液中须避免使用含自由硫醇的还原剂（如 β-ME），可使用 TCEP 替代。标记后样品可经 SDS-PAGE 分离，使用抗泛素抗体（如 FK2）或链霉亲和素-HRP（若经点击化学引入生物素）检测。