Ub-AMC 与 Ub-Rho110 如何选择？荧光底物选型指南
两种底物的核心差异
Ub-AMC 和 Ub-Rho110 虽然都是泛素 C 端偶联的荧光底物，但在荧光基团特性上存在本质差异：
| 对比维度 | Ub-AMC | Ub-Rho110 |
|---|---|---|
| 荧光基团 | AMC（香豆素类） | Rhodamine 110（罗丹明类） |
| 激发/发射 | 345 nm / 440 nm | 498 nm / 520 nm |
| 量子产率 | 中等 | 高（约为 AMC 的 3–5 倍） |
| 检测灵敏度 | nM 级 | pM 级 |
| 自发荧光干扰 | 紫外区，易受干扰 | 可见光区，干扰小 |
| 每测试成本 | 低 | 中 |
选择建议
选 Ub-AMC 的场景：
- 常规 DUB 酶活性检测，酶浓度在 nM 以上
- 酶动力学参数（Km/kcat）测定
- 反应条件优化（缓冲液、pH、温度梯度）
- 教学实验或预算有限的研究项目
选 Ub-Rho110 的场景：
- 高通量药物筛选（HTS），需要极高的 Z' 因子
- 低浓度 DUB（pM 级）活性检测
- 复杂生物基质（血清、裂解液）中的测定
- 需要长时间连续监测的光稳定性要求
常见问题
能否用 Ub-AMC 做高通量筛选？可以，但 Z' 因子通常低于 Ub-Rho110。对于大规模化合物库筛选，Ub-Rho110 的更高信噪比意味着更低的假阳性/假阴性率。
两种底物能混用吗？理论上可以，但两者的 Ex/Em 不同，需要分别设置检测通道，且可能相互干扰，不建议在同一孔中混合使用。